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❶: 突变基因功能检测,特别是帮助确认高胰岛素性低血糖(HH)的遗传学诊断,遗传诊断发现未知突变后,需要做突变基因的功能验证,可以帮助确认突变基因的致病性;

❷: 突变蛋白的制备:通过点突变和蛋白表达基础,制备一些基因的突变蛋白,可以帮助做功能验证和药物筛

        葡萄糖激酶(GCK)在糖尿病及低血糖发病中都发挥了非常重要的作用,是身体的葡萄糖感受器,通过感受血糖的变化来调节葡萄糖的代谢,在葡萄糖稳态的维护中起到了关键作用。我们已经表达制备了GST-GCK的纯化蛋白,功能检测证明了活性。华领医药的GCK激活剂已经进入3期临床试验,这个新药研发的成功必将带动以GCK为靶点的新药研发,基于我们的专业性,我们可以提供GCK激活剂的新药研发合作,通过对人GCK的酶动力学检测做新药筛选,同时我们可以也通过点突变技术制备突变GCK,并通过酶动力学研究来确认突变对GCK活性的影响,帮助临床诊断。

        谷氨酸脱氢酶(GDH)是氨基酸分解代谢的关键酶,GDH获得功能突变可以引起患儿 🅐: 高胰岛素血症性低血糖;🅑: 高蛋白餐诱发的低血糖;🅒:高氨血症;🅓: 癫痫、脑发育障碍及学习能力下降等,造成全身系统性的损害,我们可以做基于细胞体系的系统性的酶动力学检测。

         α-葡萄糖苷酶(α-GC)能催化α-1.4-糖苷键水解,是碳水化合物消化过程中的重要环节。抑制α-葡(萄)糖苷酶的活性,可使葡萄糖的生成及吸收减缓,降低餐后血糖峰值,帮助糖尿病人的血糖控制。α-GC的酶动力学检测是以PNPG为底物的酶催化反应,反应结束时加入Na2CO3溶液,在终止反应的同时显色,之后用酶标仪于405nm处测定其吸光值。

        我们可以提供α-GC抑制剂的新药研发合作。如图所示,PNPG底物剂量依赖曲线和阳性对照阿卡波糖对α-GC的抑制曲线。

        氨是重要的氨基酸代谢的产物,内源性氨是体内氨基酸经脱氨分解而成,是血液中氨的主要来源。一般来讲,肌肉和肾脏等器官的氨与谷氨酸作用生成谷氨酰胺后被运输到肝脏,在肝脏转变成尿素或其他含氮化合物后由肾脏排出体外。

        血氨的来源增加和去路的减少,都会引起血氨增加。氨测定对氨基酸代谢的研究和肝性脑病的诊断有极其重要的意义。

NH4+ + NADH + α-酮戊二酸  谷氨酸 + NAD+

*检测原理是基于上面的生化反应,在340nm波长下测定NADH吸光度在检测时间内的变化量(ΔOD),根据标准曲线的触的公式计算检测样本的氨含量。

          脂肪酶即三酰基甘油酰基水解酶,它催化天然底物油脂水解,生成脂肪酸、甘油和甘油单酯或二酯。目前与肥胖相关的疾病如高血压、高脂血症和糖尿病的发病率呈不断上升趋势,脂肪酶抑制剂可以通过抑制脂肪酶活性,减少油脂的消化吸收来达到减肥目的。对硝基苯酚酯(4-Nitrophenyl ester)是脂肪酶水解活力测定中运用最为广泛的一种底物,脂肪酶将水解为PNP(对硝基苯酚),PNP在碱性条件下显黄色,依据此原理我们建立了脂肪酶动力学检测方法,以减肥药物奥利司他为阳性对照。我公司可以提供脂肪酶抑制剂的新药研发合作,通过脂肪酶酶动力学检测做新化合物筛选。

         唾液酸(Sialic acid, SA),学名为“N-乙酰神经氨酸”,是一类广泛存在于生物系统中的糖类化合物。它广泛存在于生物体内细胞膜糖蛋白和脂蛋白中,并在生命体的许多重要生理及生化过程中发挥作用,如参与细胞识别、生存、繁衍、生物膜流动、细胞内吞作用等。感染、肿瘤、冠心病等危害人类健康的疾患多与SA的异常相关联。而对于健康人群来说,唾液酸是神经发育的重要营养素。唾液酸水平在诊断儿童早期自闭症、老年轻度认知损伤、妊娠糖尿病及孕妇或乳母体内唾液酸监测等方面具有重要的意义。我公司可提供一种试纸通过取口腔唾液作为样本, 用神经酸苷酶法制定唾液酸浓度和吸光值的关系曲线,可测得唾液中唾液酸的含量。

我们具备完善的细胞培养平台,可以实现

       1. 细胞转染:

        细胞转染技术是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术,转染的方法常采用脂质体转染、病毒转染等。图片显示质粒转染293T细胞,及慢病毒转染;

         2. 细胞毒性检测:

        细胞毒性是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。有时需要进行特定物质细胞毒性的检测,比如药物筛选。细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测,常用MTT、XTT法。利用线粒体内部酶的活性,可以将特定的四唑盐类进行转化,然后通过酶标仪进行检测。

        3. 细胞增殖检测

        细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖。通过细胞分裂,可以将复制的遗传物质,平均地分配到两个子细胞中去。细胞增殖实验包括MTT法和CCK8法。

        目前我们可以在以下两个小鼠模型开展合作,包括 GDH获得突变基因(H454Y)全身敲入小鼠(GDH-H454Y-KI),小鼠表现为高氨血症、空腹低血糖及以行为异常为表现的脑功能障碍;ATP依赖的钾离子通道全身敲除小鼠(SUR1-KO): 是高胰岛素血症低血糖的疾病小鼠模型,表现为空腹低血糖,氨基酸诱导的低血糖,胰岛表现为GSIS受损,获得对氨基酸刺激胰岛素分泌的敏感性等。

        利用计算机上的分子对接软件模拟目标靶点与候选化合物之间的相互作用,计算两者之间的亲和力,从大量化合物中挑选出苗头化合物。计算机高通量虚拟筛选不消耗化合物样品,降低了筛选的成本,并且缩短了新药研发周期。

        计算机辅助药物设计是通过计算机的模拟、计算和预算药物与受体之间的关系,设计和优化先导化合物的方法。计算机辅助药物设计实际上就是通过模拟和计算受体与配体的相互作用,进行先导化合物的优化与设计。计算机辅助药物设计是近年来发展起来的研究与开发新药的一种崭新技术,它大大加快了新药设计的速度,节省了创制新药工作的人力和物力,使药物学家能够以理论为指导,有目的地开发新药。

. 客户提出需求:客户根据自己的需求提出所需要的服务内容,之后与我们的具体项目负责人讨论实验流程及细节,我们提出具体实验方案及周期,双方确定后进入实施阶段。

. 实验周期:实验周期视具体项目而定,我们会在实验的不同阶段及时与客户沟通,讨论实验结果与进程,并根据具体实验情况做调整,最后我们提供完整的结果数据分析/成品及详细的实验报告。

葡萄糖激酶是一种催化葡萄糖磷酸化生成葡萄糖-6-磷酸的酶。葡萄糖激酶存在人类和大多数其他脊椎动物肝脏胰腺细胞中。在这些器官中,它充当葡萄糖传感器,在代谢的调节中起重要作用。该酶基因的突变可能导致糖尿病或低血糖的发生。(见图.)

我们已经完成了GST-GCK的纯化蛋白制备,酶动力学研究证明酶的活性,可以根据客户需求提供不同包装的GCK蛋白,并提供酶动力学研究服务与合作。   

谷氨酸脱氢酶(GLDH,GDH)是一种,存在于大多数微生物和真核生物线粒体中,也是尿素合成所需的酶,它将谷氨酸转化为α-酮戊二酸α-酮戊二酸参与三羧酸循环。该酶基因的突变可能诱发糖尿病或低血糖症。

人GDH H454Y突变是GTP结合位点的突变,表现为对GTP抑制作用的敏感性降低。我们已经成功构建了H454Y人突变GDH全身敲入小鼠模型,即用人突变GDH(H454Y)替代了小鼠自身的GDH。肝组织匀浆的酶动力学研究已经完成,表现为对GTP敏感性的严重受损,符合预期。